作为实验新手，提质粒的浓度往往差别很大，有的高达500~600ng/uL，有的只有几十个。使用相同的菌株和试剂盒。为什么小提浓度差别这么大？要解决这个问题，首先要了解质粒。

复制数量是我们最关心的质粒载体的特征之一。事实上，每个细菌中的质粒复制数量主要取决于质粒本身的复制特性。根据复制性质，质粒可分为两类：严格的质粒：当细菌染色体复制一次时，质粒也复制一次，每个细菌只含有1~2个质粒；松散质粒：当细菌染色体复制停止时，每个细菌一般含有约20个质粒复制。

这些质粒的复制是在宿主的放松控制下进行的。每个细菌含有10-200份副本。如果某些药物被用来抑制宿主蛋白的合成，质粒的数量也可以增加到数千份。当然，质粒复制控制系统的复制数量是恒定的.质粒的大小与培养条件有关。所以在这里你可能会问，我们可以多提一点高拷贝质粒，低拷贝数的质粒有什么作用？

事实上，低拷贝数的质粒用途不是很广泛，主要用于以下两点：高拷贝数的质粒往往不稳定，大片段克隆或有毒DNA克隆时会使用低拷贝；质粒的扩增将占用大量资源，当载体用于表达或其他用途时，也会使用低拷贝质粒。

质粒的结合转移和穿梭质粒的结合转移：是细菌遗传物质转移的重要途径。在质粒转移过程中，供体细菌和受体细菌通过结合作用紧密接触，质粒从供体细胞转移到受体，同时复制质粒。根据能否独立转移，天然质粒可分为转移型质粒和非转移型质粒。

这里需要注意的是，获得质粒的细菌可以获得一些生物学特性，如耐药性或产生细菌素的能力。从环境友好的角度来看，实验室中的废物细菌液体必须在细菌被杀死后才能倒出。穿梭质粒：指由一种类型的人工构建的质粒载体，具有两个不同的复制起点和筛选，因此可以在两个不同群体的宿主中生存和复制。

这一概念不仅可以用于不同微生物菌群之间，还可以推广到真核生物表达载体的建设，如用于枯草的pBE2.酵母的pPIC9K.哺乳动物表达载体pMT用于植物细胞的Ti质粒。这些穿梭质粒不仅可以在大肠杆菌中复制扩增，还可以在相应的枯草中复制扩增.酵母.扩增和表达动物或植物细胞。

这有利于分子生物学操作和对质粒的大量制备。一般来说，质粒不相容意味着一座山不能容忍两只老虎。但作为一门科学，我们需要一个严格的定义。“同一复制系统中使用的两个质粒将在复制和随后的自细胞分配过程中相互竞争。这种质粒不能在细菌培养物中和平共存。这种现象被称为不相容”。