质粒是细菌.生物中染色体(或拟核)以外的酵母和放线菌DNA细胞质中存在的分子(除了酵母，酵母2μm细胞核中存在质粒)，具有自主性**能力使其在后代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。它是一个封闭的环形双链DNA分子。质粒不是细菌生长繁殖所必需的物质，可以自行丢失或人工清除，如高温.紫外线等。在特定的环境条件下，质粒携带的遗传信息可以赋予宿主菌一些生物学特征，有利于细菌的生存。
独立的质粒**能力使其在后代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。细菌质粒是DNA重组技术中常用的介质。介质是一种通过基因工程将有用的外源基因送入受体细胞进行增殖和表达的工具。将目标基因片段重组到质粒中，形成重组基因或重组体。然后，通过微生物转化技术将重组体转化为受体细胞（如大肠杆菌），使重组体中的目标基因在受体细胞中繁殖或表达，从而改变主细胞的原始特性或产生新的物质。
准备工作：
配制LBAgar固体培养基(琼脂糖浓度最好为2%)LB液体培养基，50%甘油(用超纯水制备，用于储存菌株)，高压灭菌，待温度降至50℃下面，在培养基中加入相应浓度的抗性(后面可以加入液体培养基)；同时，高压灭菌对应相应的抗性；EP管，Tips，锥形瓶等；准备超净台：移液器、枪头、酒精灯、打火机、100cm培养皿等。，根据紫外线；在超净台上点燃酒精灯，倒平板，约15个ml/盘，用密封膜密封平板，放入4度冷却成型；
质粒转化取1.5mlEP管，加30ulTEBuffer，浸泡含有质粒的滤纸，4℃冰箱静放>4h。将TransStbl3ChemicallyCompetentCell(Lot#M感受态冰浴解冻，轻弹均匀。取1.5mlEP管加入10ul感受态2ul第一步的质粒。(最好设置阴性对照)42℃水浴热激45s，快速转移到冰上2min。(不要摇晃这一步EP管道)到每个步骤3中EP管内加入20ul的无菌LB液体培养基(未添加抗性)使细菌复苏，混合30后混合30℃(这个温度取决于最适合生长温度的感觉状态)，225rpm摇床摇20min(这个时间要根据经验，时间要掌握在刚涂板的时候，可以长出比较好的单菌落，太短的菌液浓度太低，长菌体慢而且太少；菌液浓度过高，菌体过大，单菌落不易选择)。在超净台中，打开并吹干冷却良好的固体培养基，每盘加入1000ul细菌液体涂层板，注意分区，连续涂层膜密封板，30℃倒置培养箱，16-20h，当你看到一个小菌体生长时，把4块木板放进去℃储存。之前准备的质粒小提LB在液体培养基中加入抗性(氨苄基1:1000)ml离心管，加入5ml加入抗性液体培养基。用新手Tips从平板中选择单克隆，将小枪头打入15ml离心管中，30℃，180rpm，摇>5h，看到液体培养基变浑浊为准。取洁净的1.5mlEP管，从15ml吸入离心管1.5ml(这个量可以根据菌液的浑浊水平加减)菌液，12000rpm，离心3min。放弃上清，加入250ulTIANGEN质粒小提Kits(Cat#DP103-03，Lot#6123)P液体，振荡，完全混合。加入250ulP液体，柔和(以防)DNA断裂)旋转6-8次，使菌体完全裂化。(这一步的总时间不应超过50min，避免过度开裂和损坏质粒)EP管内加入350ulP3液体，立即柔和上下翻转6-8次，充分混合，此时可见白色絮状沉淀，120000rpm，离心3min。（P3.添加后应立即混合，防止局部沉淀。如果上清有细微的白色沉淀，可以在离心后再取上清。)吸附柱CP3(试验前使用平衡液BL处理吸附柱可最大限度地激活硅基质膜，提高得率；BL处理后的吸附柱最好在同一天使用。如果放置时间过长，会影响效果。）将其放入收集管中，并将上清管转移到吸附柱CP3中，尽量不吸入沉淀，12000rpm，离心30-60s，将收集管中的废水倒出，将吸附柱放入收集管中。可选步骤：方向CP3里加入500ul去蛋白液PD，12000rpm，离心30-60s，将收集管中的废水倒出，将吸附柱放入收集管中。(如果是宿主菌endA宿主菌TG1.BL21.HB101.JM系列.ET12567等，推荐这一步，因为它含有大量的核酸酶；如果是这样；endA-宿主菌DH5α.TOP10等，可以省略这一步)CP3里加入600ul漂洗液PW(已添加无水乙醇)rpm，离心30-60s，将收集管中的废水倒出，将吸附柱放入收集管中。重复步骤9。12000rpm，离心2min，其目的是去除吸附柱中残留的漂洗液。将CP3.将吸附柱放入干净的1.5mlEP将50-100滴入吸附膜的中间位置ul洗脱液EB，室温放置2min，12000rpm，离心2min，收集质粒溶液EP管内。(为了提高质粒得率，可以再次在吸附柱中加入溶液CP3，室温放置2min，12000rpm，离心2min，收集质粒溶液EP管内；也可提前65-70℃预热EB液体)测量浓度，跑胶看提取质粒的质量。质粒大提
一般来说，质粒提前确定质粒的质量
取一个干净的锥形瓶，在小提步骤1中加入一个圆锥形瓶LB液体培养基100ml，小步骤2中的细菌液体10ul加入锥形瓶，30℃，180rpm，摇晃过夜，以看到液体培养基变浑浊为准。储存菌种:15%甘油储存菌种:15%.5mlEP管内加入350ul菌液150ul50%甘，混合均匀。℃储存。用500将剩余的菌液放入锥形瓶中ml离心管，4℃，8000rpm，离心5min，收集细菌沉淀，可与管道多次。根据选定的大提取试剂盒的说明，不同的试剂盒有不同的步骤。提取后，测量浓度，跑胶（由于质量颗粒含量一般较大，所以使用低浓度琼脂糖胶和大浓度**rker）